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基因敲除細胞系構(gòu)建服務(wù)：助力精準探索與技術(shù)創(chuàng)新 

隨著基因組學(xué)和分子生物學(xué)的快速發(fā)展，基因敲除技術(shù)已成為探索基因功能、研究疾病機制和開發(fā)新藥的重要工具?；蚯贸毎底鳛樵摷夹g(shù)的核心產(chǎn)品之一，廣泛應(yīng)用于學(xué)術(shù)研究、藥物篩選及疾病模型的構(gòu)建等領(lǐng)域。今天就為大家分享一下基因敲除細胞系構(gòu)建流程。

基因敲除常用于研究基因在細胞功能中的作用。下面是常用的基因敲除細胞系構(gòu)建方法和步驟：

 插入突變（Knock-in）：通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源DNA片段插入至目標基因位點，使目標基因發(fā)生突變而實現(xiàn)基因敲除的目的。這個過程通常需要克隆目標基因的編碼序列，并將突變（例如終止密碼子）或熒光標記等片段插入其中。

 CRISPR/Cas9敲除：利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)，設(shè)計合成質(zhì)粒（sgRNA和Cas9蛋白），導(dǎo)入靶向基因組并誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂。通過細胞自我修復(fù)機制（非同源末端連接或同源重組），實現(xiàn)對靶向基因的敲除。

基因敲除細胞株核心優(yōu)勢

1 高效基因編輯：雙sgRNA策略，敲除效率>90%

2多癌種覆蓋：18種標準化腫瘤細胞模型（下表）

3 嚴格質(zhì)控：STR鑒定、支原體檢測、測序驗證

 4快速交付：現(xiàn)貨細胞5個工作日內(nèi)發(fā)貨，定制服務(wù)6-8周

技術(shù)參數(shù)

參數(shù)規(guī)格

驗證方法Sanger測序 + Western Blot

敲除效率>90%（測序驗證）

脫靶率<0.1%（全基因組脫靶分析）

傳代穩(wěn)定性≥15代（基因型穩(wěn)定）

基因敲除細胞株實驗注意事項

1.細胞選擇：優(yōu)先使用 腫瘤細胞系（如HEK293、HepG2），永生細胞系可能因高拷貝數(shù)導(dǎo)致敲除困難。

2.驗證方法：基因組水平：PCR擴增靶位點+Sanger測序。

3.蛋白水平：Western Blot檢測SDK1蛋白是否缺失（需選擇大片段敲除避免假陰性）。支原體檢測：避免污染影響實驗結(jié)果。