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THP-1細(xì)胞CRISPR/Cas9基因編輯:開啟免疫和炎癥的新紀(jì)元

更新時間:2025-05-14      點擊次數(shù):502

THP-1基因敲除細(xì)胞是通過CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)實現(xiàn)的,用于研究免疫和炎癥相關(guān)機制。借助CRISPR/Cas9技術(shù)及雅吉生物的高效編輯服務(wù),科研人員可更精準(zhǔn)地進(jìn)行基因功能研究和藥物靶點篩選,為免疫疾病與感染治療開辟新思路例如,通過設(shè)計特定的sgRNA序列并將其與Cas9酶結(jié)合,可以實現(xiàn)對THP-1細(xì)胞中目標(biāo)基因的敲除,從而研究基因功能及其在疾病中的作用


研究者可以通過以下步驟構(gòu)建基因敲除細(xì)胞:

設(shè)計并驗證sgRNA序列,確保其能夠準(zhǔn)確引導(dǎo)Cas9酶切割目標(biāo)基因。

構(gòu)建表達(dá)載體,將sgRNA和Cas9基因克隆到載體中,并通過轉(zhuǎn)染方法導(dǎo)入THP-1細(xì)胞

通過篩選和克隆技術(shù)選擇成功敲除目標(biāo)基因的細(xì)胞亞群。

例如,已有研究成功利用CRISPR/Cas9技術(shù)在THP-1細(xì)胞中敲除了GPR108基因,并通過PCR和測序驗證了敲除效果

。 此外,還有研究通過類似方法敲除了其他基因(如S100A9、KCNN4等),進(jìn)一步揭示了THP-1細(xì)胞在免疫反應(yīng)中的作用


THP-1基因敲除細(xì)胞為研究免疫調(diào)控、信號通路及疾病模型提供了重要工具

THP-1細(xì)胞基因敲除的標(biāo)準(zhǔn)流程(基于慢病毒技術(shù))

在THP-1細(xì)胞中實現(xiàn)高效基因敲除,需經(jīng)過以下幾個核心步驟:

1.靶向設(shè)計與載體構(gòu)建:依據(jù)目標(biāo)基因的關(guān)鍵外顯子區(qū)域設(shè)計sgRNA,并構(gòu)建至慢病毒載體系統(tǒng)中;

2.慢病毒制備與細(xì)胞感染:使用HEK293T細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝,優(yōu)化感染MOI并借助Polybrene提高感染效率;

3.篩選與單克隆擴(kuò)增:利用抗生素篩選獲得Cas9穩(wěn)定表達(dá)株及sgRNA陽性克隆,并進(jìn)行單細(xì)胞克隆擴(kuò)增;

4.基因敲除驗證:通過測序、酶切分析及Western blot驗證目標(biāo)基因的敲除效率,確保純合克隆的獲得。


專業(yè)細(xì)胞基因編輯一站式服務(wù)商

高效率編輯:基因敲除效率高達(dá)80%,遠(yuǎn)超市場平均水平(常規(guī)方法效率10%-30%);

全面服務(wù)體系:涵蓋從sgRNA設(shè)計到敲除驗證的全流程,支持敲除、點突變、敲入等多種定制化需求;

海量成功案例:已建立超過5000種基因編輯細(xì)胞株,廣泛應(yīng)用于炎癥、腫瘤、代謝等多個研究方向;

快速響應(yīng)交付:常規(guī)項目6周內(nèi)交付,緊急項目可加急處理,助力科研加速。



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