神經母細胞瘤（Neuroblastoma, NB）是一種起源于神經嵴的胚胎性惡性腫瘤，常見于兒童，是兒童中最常見的顱外腫瘤之一。神經母細胞瘤的細胞培養(yǎng)在基礎研究和臨床治療策略的開發(fā)中具有重要意義。以下將從神經母細胞瘤細胞的培養(yǎng)方法、應用領域以及相關研究進展等方面進行詳細闡述。

一、神經母細胞瘤細胞的培養(yǎng)方法

神經母細胞瘤細胞的培養(yǎng)通常基于其來源于患者組織或細胞系的特性。常見的細胞系包括 SH-SY5Y、IMR-32、SK-N-AS、SK-N-SH、SK-N-BE(2)-C 等。這些細胞系在體外培養(yǎng)時需要特定的培養(yǎng)基和環(huán)境條件。

1. 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：通常使用 DMEM 或 Dulbecco's Modified Eagle Medium（含 10% 胎牛血清、1% 雙抗）作為基礎培養(yǎng)基。部分研究中也會使用 DMEM/F12 或 MEM 作為培養(yǎng)基。

培養(yǎng)環(huán)境：細胞培養(yǎng)通常在 37°C、5% CO? 的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中進行，以維持細胞的正常生長和代謝。

2. 傳代與凍存

傳代：當細胞密度達到 80%-90% 時，使用胰酶消化細胞，然后按比例分到新的培養(yǎng)皿或瓶中。

凍存：細胞凍存液通常為 90% 培養(yǎng)基 + 10% DMSO，液氮保存。復蘇時需在 37°C 水浴中緩慢解凍，避免細胞損傷。

3. 3D 神經球培養(yǎng)

近年來，3D 神經球培養(yǎng)技術被廣泛應用于神經母細胞瘤干細胞的研究。該方法通過在無血清條件下培養(yǎng)細胞，形成球狀結構，模擬腫瘤微環(huán)境，有助于保持細胞的干細胞特性。例如，PromoCell 3D Tumorsphere Media XF 被用于維持神經母細胞瘤干細胞的自我更新能力。

二、神經母細胞瘤細胞的應用

神經母細胞瘤細胞的培養(yǎng)不僅用于基礎研究，還在藥物篩選、治療策略開發(fā)和臨床試驗中發(fā)揮重要作用。

1. 藥物篩選與作用機制研究

PCNP 基因：研究表明，PCNP 基因的過表達可抑制神經母細胞瘤細胞的增殖，促進凋亡，并減弱其遷移和侵襲能力。這表明 PCNP 可能通過調控 MAPK 和 PI3K/AKT/mTOR 通路影響細胞行為。

miR-449a：miR-449a 通過調控 MDM4 基因表達，抑制神經母細胞瘤細胞的生長。這一發(fā)現(xiàn)為 miRNA 調控腫瘤進展提供了新的思路。

粉防己堿：粉防己堿被發(fā)現(xiàn)可顯著抑制神經母細胞瘤細胞的增殖和遷移能力，其作用機制可能與 MAPK 通路的激活有關

。

2. 干細胞特性與腫瘤球形成

神經母細胞瘤干細胞（Cancer Stem Cells, CSCs）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移中起關鍵作用。通過 3D 神經球培養(yǎng)，可以觀察到 CSCs 的自我更新能力和分化潛能。例如，CD133 是 CSCs 的標志物之一，其表達水平與腫瘤的侵襲性和不良預后相關

。此外，腫瘤球形成能力 是評估 CSCs 特性的常用指標，不同細胞系的腫瘤球形成能力存在差異

3. 疫苗與免疫治療

神經母細胞瘤疫苗的研究也取得了重要進展。例如，斯隆凱特琳癌癥中心研發(fā)的二價神經母細胞瘤疫苗在臨床 I 期試驗中顯示出良好的療效，無病生存率在 12 個月時為 87%，在 24 個月時為 80%。該疫苗通過激活免疫系統(tǒng)，使患者自身免疫細胞攻擊腫瘤細胞，具有良好的安全性和耐受性。

三、總結

神經母細胞瘤的細胞培養(yǎng)在基礎研究和臨床治療中具有重要作用。通過 3D 神經球培養(yǎng)等先進技術，可以更好地模擬腫瘤微環(huán)境，保持細胞的干細胞特性。此外，神經母細胞瘤的治療策略正在向個體化、精準化方向發(fā)展，靶向治療和免疫治療等新型治療手段為神經母細胞瘤的治療提供了新的希望。未來的研究應進一步探索神經母細胞瘤的分子機制，以開發(fā)更有效的治療策略。