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基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)：助力精準(zhǔn)探索與技術(shù)創(chuàng)新

隨著基因組學(xué)和分子生物學(xué)的快速發(fā)展，基因敲除技術(shù)已成為探索基因功能、研究疾病機(jī)制和開(kāi)發(fā)新藥的重要工具?；蚯贸?xì)胞系作為該技術(shù)的核心產(chǎn)品之一，廣泛應(yīng)用于學(xué)術(shù)研究、藥物篩選及疾病模型的構(gòu)建等領(lǐng)域。今天就為大家分享一下基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建流程。

基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建的技術(shù)流程

1.目標(biāo)基因選擇與設(shè)計(jì)敲除策略并制備敲除載體

2. 轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)

3. 篩選與驗(yàn)證

4. 單克隆篩選

5. 基因敲除驗(yàn)證

基因敲除細(xì)胞應(yīng)用

敲除細(xì)胞作為重要的研究模型，廣泛應(yīng)用于探究基因功能、疾病機(jī)制和藥物靶點(diǎn)篩選。通過(guò)模擬基因缺失對(duì)細(xì)胞行為的影響，可以揭示特定基因在生物學(xué)過(guò)程中的作用以及它們?cè)诩膊“l(fā)展中的關(guān)鍵性。

基因敲除（KO）細(xì)胞系正是CRISPR/Cas9介導(dǎo)基因編輯中最典型的應(yīng)用之一。以下是KO細(xì)胞系的主要應(yīng)用方向：

抗體特異性驗(yàn)證

抗體是生命科學(xué)中使用泛的試劑之一，但目前缺少統(tǒng)一的特異性驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。未驗(yàn)證的抗體容易產(chǎn)生非特異性結(jié)果，影響實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。KO細(xì)胞系可作為抗體特異性驗(yàn)證的重要工具，通過(guò)與野生型細(xì)胞平行對(duì)照，為試劑質(zhì)量把關(guān)。未來(lái)，KO細(xì)胞系有望成為抗體驗(yàn)證的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

確定參與通路的基因

一條信號(hào)通路通常涉及多個(gè)分子與過(guò)程?；蚯贸?xì)胞可用于驗(yàn)證特定基因或突變的功能。例如，JAK1基因在細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)和腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。敲除JAK1后，STAT磷酸化水平可通過(guò)Western blot檢測(cè)是否發(fā)生變化，從而確定其在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的作用。

確定藥物靶點(diǎn)

研究通路中基因功能常用藥理學(xué)干預(yù)結(jié)合基因編輯的方法。以6-硫鳥(niǎo)嘌呤（6-TG）為例，該藥物依賴DNA錯(cuò)配修復(fù)（MMR）系統(tǒng)發(fā)揮作用。通過(guò)HPRT和目標(biāo)基因的聯(lián)合敲除，可篩選6-TG的耐藥性細(xì)胞，進(jìn)而驗(yàn)證藥物作用機(jī)制及潛在靶點(diǎn)。

建立疾病模型

基因敲除（KO）細(xì)胞系是通過(guò)基因編輯技術(shù)刪除或失活特定基因，幫助研究人員深入理解基因在細(xì)胞功能、發(fā)育以及疾病中的作用。在疾病模型的建立中，KO細(xì)胞系提供了一個(gè)強(qiáng)大的工具，能夠模擬特定的基因缺失或突變，進(jìn)而幫助研究疾病的分子機(jī)制，開(kāi)發(fā)新藥，甚至測(cè)試治療方案。

開(kāi)發(fā)治療工具

近年來(lái)，多個(gè)基因編輯臨床試驗(yàn)相繼展開(kāi)。包括基于基因敲除的CAR-T細(xì)胞、敲除BCL11A增強(qiáng)子提升γ球蛋白表達(dá)，用于治療鐮刀狀細(xì)胞病和β-地中海貧血。目前，已有多項(xiàng)臨床試驗(yàn)嘗試敲除T細(xì)胞PD-1基因，應(yīng)用于前列腺癌、食管癌、腎細(xì)胞癌等治療，這些試驗(yàn)被視為體外CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)在癌癥治療中概念驗(yàn)證的重要突破。

雅吉生物的優(yōu)勢(shì)

雅吉生物依托強(qiáng)大的基因編輯平臺(tái)和豐富的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，能夠?yàn)榭蛻籼峁幕虬悬c(diǎn)設(shè)計(jì)、載體構(gòu)建到細(xì)胞系驗(yàn)證的一站式服務(wù)。無(wú)論是基礎(chǔ)研究中的小規(guī)模定制需求，還是大規(guī)模藥物篩選中的高通量構(gòu)建，我們都能夠?yàn)榭蛻籼峁└咝А⒕珳?zhǔn)的解決方案。