細(xì)胞名稱：NEC食管癌細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細(xì)胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代：

A1、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min；

2、棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上。

B1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2、貼壁細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

細(xì)胞復(fù)蘇：

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS221C（ATCC)NCI-H661肺癌細(xì)胞人大細(xì)胞

YS222CNCI-N87[N87]人胃癌細(xì)胞

YS223CNEC食管癌細(xì)胞

YS224CNeuro-2a小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞

YS225CG-CSF依賴性NFS-60小鼠白血病細(xì)胞

YS227CNIH3T3小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

YS228CNK-92MI惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

YS229CNR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞

YS230CNRK大鼠腎細(xì)胞

YS231CNRK-49F大鼠正常腎成纖維細(xì)胞

YS232CNRK-52E大鼠腎細(xì)胞

YS233CNTERA-2人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞

YS234CNUTU-19大鼠卵巢癌細(xì)胞

YS235COK負(fù)鼠腎細(xì)胞

YS236COS-RC-2人腎癌細(xì)胞

YS237COVCaR-3人卵巢癌細(xì)胞

YS238CP19小鼠畸胎瘤細(xì)胞

YS239CP3-X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細(xì)胞

YS240CP815癌細(xì)胞小鼠肥大細(xì)胞

YS241CPA319人大腸癌細(xì)胞

YS242CPANC-1人胰腺癌細(xì)胞

YS243CPC12瘤細(xì)胞大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞

YS244C（低分化）PC-12（低分化）瘤細(xì)胞大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞

YS245C（高分化）PC-12（高分化）瘤細(xì)胞大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞

YS246C（未分化）PC-12（未分化）瘤細(xì)胞大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞

YS247CPC-3前列腺癌細(xì)胞

YS248CPC-3M人前列腺癌細(xì)胞

YS249CPIEC豬動脈內(nèi)皮細(xì)胞

YS250CPK（15）豬腎細(xì)胞

YS251CQGY-7701人肝癌細(xì)胞

YS252CRaji人Burkitt`s淋巴瘤細(xì)胞

YS253C瘤RAMOS（懸?。〣淋巴細(xì)胞

YS254CRAW264.7白血病細(xì)胞小鼠單核巨噬細(xì)胞

YS255CRBE人肝膽管癌細(xì)胞

YS256CRH-35大鼠肝癌細(xì)胞

YS257Cβ胰島素瘤RIN-M5F

YS258CRKO人結(jié)腸癌細(xì)胞

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