細(xì)胞名稱：NSC-34鼠神經(jīng)元細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的 辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶,消毒后

放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進(jìn)

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細(xì)胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS1249P大鼠皮層神經(jīng)元原代細(xì)胞

YS1250P大鼠海馬神經(jīng)元原代細(xì)胞

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YS1252P大鼠腦成纖維原代細(xì)胞

YS1253P大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)原代細(xì)胞

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YS1258P大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)原代細(xì)胞

YS1259P大鼠角膜成纖維原代細(xì)胞

YS1260P大鼠背根神經(jīng)元原代細(xì)胞

YS1261P大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖原代細(xì)胞

YS1262P大鼠骨髓間充質(zhì)干原代細(xì)胞

YS1263P大鼠肝枯否原代細(xì)胞

YS1264P大鼠海綿體內(nèi)皮原代細(xì)胞

YS1265P大鼠心臟微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

YS1266P大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)原代細(xì)胞

YS1267P大鼠神經(jīng)干原代細(xì)胞

YS1268P大鼠骨髓來源巨噬原代細(xì)胞

YS1269P大鼠胸腺上皮原代細(xì)胞

YS1270P大鼠胸腺淋巴原代細(xì)胞

YS1271P大鼠脊髓神經(jīng)元原代細(xì)胞

YS1272P大鼠椎間盤髓核原代細(xì)胞

YS1273P大鼠視乳頭星形膠質(zhì)原代細(xì)胞

YS1274P大鼠脂肪干原代細(xì)胞

YS1275P大鼠前列腺平滑肌原代細(xì)胞

YS1276P大鼠骨髓單核原代細(xì)胞

YS1277P大鼠終板軟骨原代細(xì)胞

YS1278P大鼠表皮成纖維原代細(xì)胞

YS1279P大鼠表皮角化原代細(xì)胞

YS1280P大鼠肺泡巨噬原代細(xì)胞

YS1281P大鼠腹膜間皮原代細(xì)胞

YS1282P大鼠腹腔巨噬原代細(xì)胞

YS1283P大鼠肝外膽管上皮原代細(xì)胞

YS1284P大鼠睪丸支持原代細(xì)胞

YS1285P大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干原代細(xì)胞

YS1286P大鼠骨髓樹突狀原代細(xì)胞(DC原代細(xì)胞)

YS1287P大鼠骺軟骨原代細(xì)胞

YS1288P大鼠呼吸道上皮原代細(xì)胞

YS1289P大鼠肌腱干原代細(xì)胞

YS1290P大鼠肌源性干原代細(xì)胞

YS1291P大鼠脊髓成纖維原代細(xì)胞

YS1292P大鼠角膜基質(zhì)原代細(xì)胞

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