細(xì)胞名稱：NCI-H1299人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？細(xì)胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細(xì)胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細(xì)胞增殖形成匯合地單層細(xì)胞或密集地細(xì)胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞zui大的生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的*性。細(xì)胞系是不斷生長，分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。實(shí)際上，連續(xù)細(xì)胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。

2、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗(yàn)才能開始正常人類細(xì)胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗(yàn)者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗(yàn)的話對(duì)其它細(xì)胞類型也是很有利的。如果你是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，我們會(huì)為你提供幫助。請(qǐng)的細(xì)胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細(xì)胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。

二）細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS4071C人前列腺癌細(xì)胞DU 145

YS4072C人肝癌細(xì)胞Hep G2

YS4073C人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SK-N-SH

YS4074C人乳腺癌細(xì)胞SK-BR-3

YS4075C人結(jié)腸腺癌細(xì)胞SW480

YS4076C人骨肉瘤細(xì)胞MG-63

YS4077C人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231

YS4078C人結(jié)腸腺癌細(xì)胞Caco-2

YS4079C人肝癌細(xì)胞Hep 3B2.1-7

YS4080C人表皮樣癌皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞A-431

YS4081C人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U-87 MG

YS4082C人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞K-562

YS4083C人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60

YS4084C人EBV伯基特淋巴瘤Raji

YS4085C人急性單核細(xì)胞白血病U-937

YS4086C人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞CCRF-CEM

YS4087C人伯基特淋巴瘤細(xì)胞Daudi

YS4088C人急性淋巴細(xì)胞白血病MOLT-4

YS4089C人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460

YS4090C人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H1299

YS4091C人結(jié)腸腺癌細(xì)胞COLO 205

YS4092C人結(jié)腸腺癌細(xì)胞DLD-1

YS4093C人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC

YS4094C人肺癌細(xì)胞A549

YS4095C人前列腺癌細(xì)胞PC-3

YS4096C人胃腺癌細(xì)胞AGS

YS4097C人宮頸腺癌細(xì)胞HeLa S3

YS4098C人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y

YS4099C人結(jié)腸癌細(xì)胞T84

YS4100C人乳腺癌細(xì)胞MCF7

YS4101C人乳腺管癌細(xì)胞T-47D

YS4102C人急性單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞THP-1

YS4103C人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF 10A

YS4104C人胚腎上皮細(xì)胞-表達(dá)SV40T抗原293FT

YS4105C人腦多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞T98G

YS4106C小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞RAW 264.7

YS4107C人皮膚腺癌細(xì)胞Hs 865.Sk

YS4108C小鼠成肌細(xì)胞C2C12

YS4109C人胃癌細(xì)胞SNU-16

YS4110C人B淋巴細(xì)胞瘤伯基特淋巴瘤細(xì)胞Ramos

YS4111C人肺癌細(xì)胞NCI-H661

YS4112C人結(jié)腸腺癌細(xì)胞LS 174T

YS4113C人肺癌細(xì)胞A-427

YS4114C 大鼠胰腺beta細(xì)胞大鼠胰島素瘤細(xì)胞RIN-5F

YS4115C人外周血套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞Mino

YS4116C人外周血套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞JeKo-1

YS4117C人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞REC1

YS4118C人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞SU-DHL-6

YS4119C人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞JVM2

YS4120C人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系Plat-E

YS4121C人結(jié)腸癌細(xì)胞RKO

YS4122C人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞T/G HA-VSMC

YS4123C人正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1

YS4124C正常人結(jié)腸組織細(xì)胞CCD-18Co

YS4125C類成淋巴細(xì)胞系GM24385 (LCL from B-Lymphocyte)

YS4126C人皮膚成纖維細(xì)胞BJ

YS4127C小鼠骨髓瘤淋巴母細(xì)胞/雜交瘤B淋巴細(xì)胞IVA12

YS4128C人肺癌腺癌細(xì)胞LC-2/ad

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