超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等

，使其交聯(lián)或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得

到了廣泛的關(guān)注。生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過(guò)單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，O2-既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸

等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過(guò)氧化氫及脂質(zhì)過(guò)氧物自由基等對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。

超氧陰離子自由基檢測(cè)試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子產(chǎn)生速率檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是在酸性條件下

，2份O2-與羥胺反應(yīng)生成1份NO2-，NO2-在對(duì)氨基苯磺酸和萘胺的作用下反應(yīng)生成粉紅色的偶氮物質(zhì)，

以酶標(biāo)儀測(cè)定530nm處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與O2-成正比，根據(jù)A530及NO2-和O2-的相關(guān)反應(yīng)中物質(zhì)的量的關(guān)系，

可算出樣品中O2-的濃度，主要用于測(cè)定植物組織中的超氧陰離子自由基含量或超氧陰離子的產(chǎn)生速率。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測(cè)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測(cè)。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對(duì)照孔測(cè)定孔

蒸餾水150100

待測(cè)樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測(cè)︰

以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為   A測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A測(cè)定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定

孔的吸光度。

注意事項(xiàng)∶

1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測(cè)，亦可-20°℃保存。

3、如果沒(méi)有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積。

4、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

超氧陰離子自由基檢測(cè)試劑盒(磺胺比色法)更多產(chǎn)品咨詢：

YS1189肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(PA速率比色法)

YS1191肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)微板法)

YS1193肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)比色法)

YS1195尿酸(UA)檢測(cè)試劑盒(磷鎢酸微板法)

YS1197尿酸(UA)檢測(cè)試劑盒(磷鎢酸比色法)

YS1238甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒(乙酰丙酮微板法)

YS1239甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒(乙酰丙酮比色法)

YS1241甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒(GPO-PAP單試劑微板法)

YS1243甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒(GPO-PAP單試劑比色法)

YS1245甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒(GPO-PAP雙試劑微板法)

YS1247甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒(GPO-PAP雙試劑比色法)

YS13555′-核苷酸檢測(cè)試劑盒(過(guò)碘氧化法)

YS2023維生素B1檢測(cè)試劑盒(熒光光度法)

YS2025維生素B2檢測(cè)試劑盒(熒光光度法)

YS2031維生素C檢測(cè)試劑盒(磷鉬酸微板法)

YS2033維生素C檢測(cè)試劑盒(磷鉬酸比色法)

YS2034維生素C檢測(cè)試劑盒(銅氧化微板法)

YS2035維生素C檢測(cè)試劑盒(銅氧化比色法)

YS2038維生素C檢測(cè)試劑盒(菲咯啉微板法)

YS2039維生素C檢測(cè)試劑盒(菲咯啉比色法)

YS2041脫氫抗壞血酸(DHA)檢測(cè)試劑盒(菲咯啉比色法)

YS2045維生素C檢測(cè)試劑盒(碘量滴定法)

YS2055還原型維生素C檢測(cè)試劑盒(二氯酚靛酚滴定法)

YS2057還原型維生素C檢測(cè)試劑盒(二氯酚靛酚比色法)

YS2113可溶性果膠(SP)檢測(cè)試劑盒(咔唑比色法)

YS2121原果膠(PP)檢測(cè)試劑盒(咔唑微板法)

YS2123原果膠(PP)檢測(cè)試劑盒(咔唑比色法)

52719P52719pCMV-EGFP-STUB1(human)-3×FLAG-Neo

52720P52720pPGK-Fluc-DIABLO(AQhuman)-3UTR-hRluc-Neo

52721P52721pHAGE-CMV-3×HA-EEA1(human)-Hyg

52722P52722pCMV-CEP19(human)-EGFP-Neo

52723P52723pCMV-NPC1L1(human)-mCherry-Neo

52724P52724pmini35S-Rluc-CmR

52725P52725pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA2-CopGFP-Puro

52726P52726pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA2-CopGFP-Puro

52727P52727pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

52728P52728pLV3-U6-PGM5-AS1(human)-lncRNA-shRNA3-CopGFP-Puro

52729P52729pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

52730P52730pLV3-U6-PGM5-AS1(human)-lncRNA-shRNA2-CopGFP-Puro

52731P52731pLV3-U6-SLC1A3(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

52732P52732pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

52733P52733pLV3-U6-BUD23(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

52734P52734pLV3-U6-BUD23(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

52735P52735pLV3-U6-BUD23(human)-shRNA2-CopGFP-Puro

52736P52736pLV3-U6-CCNE1(human)-shRNA4-Puro

52737P52737pLV3-U6-KMT2D(human)-sgRNA4-Cas9-EGFP-Puro

52738P52738pLV3-U6-Fndc5(mouse)-sgRNA1-Cas9-EGFP-Puro

52739P52739pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

52740P52740pLV3-U6-PODXL2(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

52741P52741pCMV-NLRP14(human)-3×FLAG-Neo

52742P52742pCMV-CHAT(human)-3×FLAG-Puro

52743P52743pLV3-U6-JAK2(human)-sgRNA1-sgRNA2-Cas9-EGFP

52744P52744pCMV-GLDN(human)-P2A-mCherry-Neo

52745P52745pLV2-CMV-TRIM41(human)-Myc-Puro