Rnase A(20mg/ml)試劑，不含DNase及蛋白酶，是一種核糖核酸內(nèi)切酶，可特異性降解單鏈RNA的C及U殘基部位。它可以剪切核苷酸5'-核糖與相鄰的嘧核苷酸3'-核糖上所連磷酸基團(tuán)間的磷酸二酯鍵，獲得的2', 3'-環(huán)狀磷酸鹽可進(jìn)一步水解為相應(yīng)的3'-核苷磷酸。該酶的濃度為20mg/ml，活力約1500U/ml。

單位定義

一個單位定義為在25°C、pH 5.0的條件下，催化水解RNA的一級反應(yīng)速度常數(shù)為1.0時的RNase A量。

儲存

置于-20°C，可保存3年。該酶室溫也極其穩(wěn)定。

使用注意事項(xiàng)

（1） 該酶對溫度不敏感，但最佳反應(yīng)溫度為37°C。

（2） 該酶可在含有SDS的條件下發(fā)揮活性。

（3） 通常去除基因組DNA中的RNA污染的使用比例為1:200~1000。

（4） 使用前無需再加熱處理。

Rnase A(20mg/ml)試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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