細胞名稱：U251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養(yǎng)；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細胞傳代：

A1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min；

2、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上。

B1、對于貼壁細胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2、貼壁細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

細胞復蘇：

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS291CTE-10人食管癌細胞

YS292CTE-11人食管癌細胞

YS293CTE-13人食管癌細胞

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YS295CTHP-1白血病細胞人單核細胞

YS296C非雄激素依賴型前列腺癌Tsu-prl

YS297CTT人髓狀甲狀腺腫瘤細胞

YS298C瘤U-118MG人腦星形膠質(zhì)母細胞

YS299C宮頸癌U14（懸?。?/span>

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YS301CU251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

YS302C骨髓瘤U266

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YS306CV79中國倉鼠肺細胞

YS307CVCAP(ATCC)人前列腺癌細胞

YS308CVE人血管內(nèi)皮細胞

YS309CVero綠猴腎細胞

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YS311CWI-38人胚肺成纖維細胞

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YS318CLX2人肝星狀細胞

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YS320CPATU-8988人胰腺癌細胞

YS321CKYSE30人食管鱗狀癌細胞

YS322C2.2.15hepg2.2.15人肝癌細胞

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YS324C株NCI-H3255人肺癌細胞

YS325CBV-173人外周血B細胞

YS326CHCV-29人膀胱上皮細胞

YS327CHKC人腎小管上皮細胞

YS328CHTR8人滋養(yǎng)細胞

YS329CIM-9人外周血B淋巴細胞

YS330C瘤J774A.1小鼠腹水單核細胞

YS331CLP-1人多發(fā)性骨髓瘤細胞

YS332CMAVER-1人淋巴瘤細胞

YS333CMIAPaCa-2人胰腺癌腫瘤細胞

YS334CNCI-H226人肺鱗癌細胞

YS335CSCC4人口腔鱗癌細胞

YS336CSCC9人舌鱗癌細胞

YS337CSKO-007人骨髓瘤細胞

YS338CTM4正常小鼠睪丸細胞

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